二手HPLC液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是二手高效液相色谱仪HPLC得到好的色谱图的关键。
                              

（一）二手HPLC谱图峰拖尾的原因和解决方法 
1、筛板阻塞 ：反冲色谱柱，更换进口筛板，更换色谱柱 ；
2、色谱柱塌陷 ：填充色谱柱 ；
3、干扰峰 ：使用更长的色谱柱，改变流动相或更换色谱柱 ；
4、流动相PH选择错误 ：调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰 ；
5、样品与填料表面的溶化点发生反应图 ：加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂，更改色谱柱。

（二） 二手HPLC谱图 峰前延的原因和解决方法 
1、柱温低 ：升高柱温 ；
2、样品溶剂选择不恰当 ：使用流动相作为样品溶剂 ；
3、样品过载：降低样品含量 ；
4、色谱柱损坏：反冲色谱柱，填充色谱柱。

（三） 二手HPLC谱图 峰分叉的原因和解决方法

1、保护柱或分析柱污染图 ：取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。

2、样品溶剂不溶于流动相 ：改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。

（四） 二手HPLC谱图 峰变形的原因和解决方法 
样品过载 ：减少样品载量

（五） 二手HPLC谱图 早出的峰变形的原因和解决方法 
样品溶剂选择不恰当 ：减少进样体积，运用低极性样品溶剂。

（六） 二手HPLC谱图 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰的原因和解决方法 
柱外效应：调整系统连接（使用更短、内径更小的管路），使用小体积的流通池。

（七） 二手HPLC谱图 K’增加时，脱尾更严重的原因和解决方法 
1、二级保留效应，反相模式：加入三乙胺（或碱性样品），加入乙酸（或酸性样品），加入盐或缓冲剂（或离子化样品），更换一支柱子 ；
2、二级保留效应，正相模式 ：加入三乙胺（或碱性样品），加入乙酸（或酸性样品），加入水（或多官能团化合物），试用另一种方法 ；
3、二级保留效应，离子对：加入三乙胺（或碱性样品）。

（八） 二手HPLC谱图 酸性或碱性化合物的峰拖尾的原因和解决方法 
缓冲不合适：使用浓度50-100mM的缓冲液，使用Pka等于流动相PH值的缓冲液。

（九） 二手HPLC谱图 额外的峰的原因和解决方法 
1、样品中有其他组份：正常 ；
2、前一次进样的洗脱峰 ：增加运行时间或梯度斜率，提高流速；
3、空位或鬼峰：检查流动相是否纯净，使用流动相作为样品溶剂，减少进样体积。

（十） 二手HPLC谱图 保留时间波动的原因和解决方法 
1、温控不当 ：调好柱温 ；
2、流动相组分变化 ：防止变化（蒸发、反应等） ；
3、色谱柱没有平衡 ：在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱。

（十一） 二手HPLC谱图保留时间不断变化的原因和解决方法 

1、流速变化 ：重新设定流速 ；
2、泵中有气泡 ：从泵中除去气泡 ；
3、流动相选择不恰当 ：更换合适的流动相；选择合适的混合流动相。